众所周知，养殖场的消毒池是门卫消毒系统一个关键组成部分，是隔绝外界病原微生物进入养殖场内环境的重要门户。笔者通过调查走访多家规模养猪场和养鸡场，了解到目前规模场技术人员对消毒池的消毒剂选择、更换频率、消毒效果的认知存在许多误区。因此笔者模拟消毒池状况对当前消毒池多种常用消毒剂进行杀菌对比试验，希望试验结果能对规模养殖场的相关技术人员起到参考借鉴作用。
一、材料
1、消毒剂：NaOH水溶液（2%水溶液，烧碱为市场采购工业级，25KG装，含量98%，批号：20150304）；消毒威水溶液（含二氯异氰脲酸钠30%，由湖南五指峰有限公司提供，批号：20150501，按1:1200倍稀释）；五指峰新菌敌水溶液（含量：戊二醛5%+癸甲溴铵5%，批号：20150517，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:500倍稀释）；好典水溶液（含聚维酮碘5%，批号：20150602，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:300倍稀释）。
2、消毒剂指标菌：大肠埃希氏菌（8099）、多杀性巴氏杆菌（禽株）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、蜡状杆菌芽孢（SSICl/1）。（均购自中国兽药监察所）
3、中和剂的配制
（1）中和剂（1）：自制复合中和剂，用于中和消毒威水溶液、新菌敌水溶液、好典水溶液。精密称取无水磷酸氢二钠2.83g、磷酸二氢钾1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2g、硫代硫酸钠5g、卵磷脂3g、甘氨酸3g、吐温-80各30mL。将各成分加入到1L蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20min，冰箱保存备用。（以上试剂和试药均购自国药集团化学试剂有限公司）
（2）中和剂（2）：2%NaOH水溶液，需要等当量的酸来中和。因此，通过计算摩尔含量，将5.56g含量为36%的浓HCl溶液加入1000g纯化水中配制成NaOH水溶液中和剂，于121℃压力蒸气灭菌20min，冰箱保存备用。
4、稀释液：氯化钠注射液（0.9%）。（购自四川科伦药业公司）
二、方法｛参照《兽用消毒剂鉴定技术规范》（1992）农（牧药）字第101号｝
1、中和剂选择试验：选择指定浓度的消毒剂，以蜡样杆菌芽孢和大肠杆菌为受试菌，分别进行中和剂鉴定试验。试验可分为6组：第1组：消毒剂＋菌悬液；第2组：（消毒剂＋菌悬液）＋中和剂；第3组：中和剂＋菌悬液；第4组：（消毒剂＋中和剂）＋菌悬液；第5组：稀释液＋菌悬液；第6组：中和剂＋稀释液。
2、细菌、芽孢悬液定量杀菌试验
（1）将制备的菌液进行活菌计数，然后用氯化钠注射液稀释成含菌106～107CFU/mL的试验菌液；
（2）将消毒剂样品用纯化水按指定稀释比例稀释至测试浓度；
（3）吸取0.5mL试验菌液于4.5mL测试浓度的消毒剂溶液内；
（4）置20℃水浴中作用5分钟；
（5）立即吸取上述菌药混合液1.0mL，加入9.0mL中和液中混匀；
（6）以氯化钠注射液（0.9%）代替消毒液，同时进行上述各步骤，作为对照组；
（7）以上各步骤均设置一个平行对照；
（8）中和10分钟后进行活菌计数，37℃培养24h，计算杀菌率；
（9）模拟消毒池实际状况，将各试验消毒剂敞开暴露在室外，每天重复进行上述试验，共7天，记录试验数据，分析试验结果。
三、结果
1、中和剂选择试验的试验结果为第1组不长菌或有极少数菌生长；第2组长少量菌且比第1组多，比第3、4、5组的菌数少；第3、4、5组的菌数相当且误差率小于15%；第6组无污染。说明所配制中和剂在细菌和芽孢的杀菌试验中可有效中和本消毒剂，并对细菌、芽孢及培养基无不良影响。
2、消毒剂（第一天）对细菌、芽孢悬液定量杀菌试验结果见表一。
3、试验持续7天，每天重复杀菌试验效果见表二。
四、结论
2%NaOH水溶液、湖南五指峰生化有限公司生产的消毒威1:1200倍稀释、新菌敌1：500倍稀释、好典1:300倍稀释的水溶液（现配现用），作用5分钟对大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状杆菌芽孢的杀灭率99.9%以上，其消毒效能符合规定。
四种试验消毒剂对大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状杆菌芽孢四种消毒剂指标菌的杀灭率在第一天都能达到99.9%以上，其消毒效能符合要求。2%NaOH水溶液在第二天杀菌率未达到99.9%以上；30%消毒威1:1200倍稀释的水溶液在第四天杀菌率未达到99.9%以上；新菌敌1：500倍稀释的水溶液在第三天杀菌率未达到99.9%以上；好典1:300倍稀释的水溶液在第二天杀菌率未达到99.9%以上，其消毒效能不符合规定。
五、说明
1、依据《现代药理实验方法》的体外杀菌实验的菌落计数方法，低于5个菌落的视同为杀菌完全，故试验消毒剂大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状杆菌芽孢的杀菌率计为100%；
2、氯化钠注射液对照组的平板均有大量细菌生长，其菌落数按试验菌液100倍稀释后的菌落数计算。
3、依据《兽用消毒剂鉴定技术规范》（1992）农（牧药）字第101号的试验消毒效能判断标准，杀灭指数须达103或杀菌率达99.9%以上，故试验消毒剂消毒效能符合规定。
六、分析
通过试验结果可知，四种消毒池常用消毒剂在现配现用的情况下都具有良好的消毒效果，具有速效、强效的杀灭效力，在5分钟内即车轮缓慢经过消毒池时能有效消毒。在持续7天的试验中可见，NaOH水溶液和好典稀释液在暴露室外的第二天还能维持90%以上对四种消毒剂指标菌的杀灭率，在第四天杀菌率下降一半，在第六天基本不具备杀菌能力。分析其原因，NaOH水溶液能与空气中的二氧化碳反应生成NaCO3，使溶液中NaOH含量迅速下降，导致杀菌效力急速递减；好典中的聚维酮碘在高温和阳光曝晒下急速分解，含量急速下降，使杀菌效力快速降低。这两种消毒剂不适合长期使用，因此建议养殖场用户不要在消毒池使用NaOH和聚维酮碘溶液。消毒威和新菌敌稀释液在1-2天内能维持99.9%以上的杀菌率，在第四天还能维持90%左右的杀菌率，在第七天还具有60%～80%的杀菌率，具有高效、速效、长效作用，能做为消毒池专用消毒剂使用。消毒威主要成分为二氯异氰脲酸钠，是一种高效、广谱、新型内吸性杀菌剂，可杀灭各种细菌、藻类、真菌和病毒；化学性质稳定，便于贮存运输；使用安全、简便、用量少、药效持续时间长；作用在物体表面能慢慢地释放次氯酸（HClO），通过使菌体蛋白质变性，改变膜通透性，干扰酶系统生理生化及影响DNA合成等过程，使病原体迅速死亡。新菌敌主要含有戊二醛和癸甲溴铵。戊二醛属高效消毒剂，具有广谱、高效、低毒、对金属腐蚀性小、受有机物影响小、稳定性好等特点，主要作用于菌体蛋白的巯基、羟基、羧基和氨基，可使之烷基化，引起蛋白质凝固造成细菌死亡。癸甲溴铵为双链季铵盐类阳离子表面活性剂，其季铵阳离子能主动吸引并富集于带负电荷的细菌和病毒表面，阻碍细菌代谢，导致其膜的通透性发生改变。二者复配而成的新菌敌消毒剂，对各类病原微生物具有高效、速效、长效的杀灭作用，使用后残留少、安全、环保，是理想的新型复配消毒剂。
通过结论分析，我们推荐在养殖场消毒池使用30%消毒威（通用名：二氯异氰脲酸钠粉）按1:1200倍稀释、新菌敌（通用名：戊二醛癸甲溴铵溶液）按1:500倍稀释进行车轮和鞋底消毒，每5-6天更换1次；不建议使用烧碱（NaOH）和聚维酮碘溶液消毒。
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